朱雀x鲁鲁修纯r18漫:免疫组化染色方法(SP法和SABC法)

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免疫组化染色方法(SP法和SABC法)

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免疫组化染色方法(SP法和SABC法)关键词:染色免疫免疫组化染色SP法SABC法SP
1)脱蜡、水化;
2)PBS洗2~3次各5分钟;
3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上,室温静置10分钟;
4)PBS洗2~3次各5分钟; 5)抗原修复;
6)PBS洗2~3次各5分钟;
7)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。
8)滴加Ⅰ抗50μl,室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。
9)4℃过夜后需在37℃复温45分钟。
10)PBS洗3次各5分钟;
11)滴加Ⅱ抗40~50μl,室温静置,或37℃1小时;
12)II抗中可加入0.05%的tween-20。
13)PBS洗3次各5分钟;
14)DAB显色5~10分钟,在显微镜下掌握染色程度;
15)PBS或自来水冲洗10分钟;
16)苏木精复染2分钟,盐酸酒精分化;
17)自来水冲洗10~15分钟;
18)脱水、透明、封片、镜检。SABC
1)脱蜡、水化。
2)PBS洗两次各5分钟。
3)用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2,室温封闭5~10分钟,蒸馏水洗3次。
4)抗原修复。
5)PBS洗5分钟。
6)滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。
7)滴加Ⅰ抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时(4℃过夜后在37℃复温45分钟)。
8)PBS洗三次每次2分钟。
9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分钟。
10)PBC洗3次每次2分钟。
11)滴加试剂SABC,20℃~37℃20分钟。12)PBS洗4次每次5分钟。
13)DAB显色:DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色(镜下掌握显色程度)。
14)蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。
15)脱水、透明、封片、镜检。